Cultivo y aislamiento de microorganismos marinos - 3

Las categorias nutricionales de los microorganismos son:

Quimiolitotrofos: obtienen su energía a partir de la oxidación de compuestos inorgánicos (sería el caso de la oxidación de NH3 > NO2 > NO3 que sucede con las bacterias nitrificantes)
Quimioorganotrofos: utilizan compuestos orgánicos para obtener su energía. Es el amplio y variado grupo de los microorganismos heterótrofos o saprofitos (utilizan compuestos como polisacáridos, lípidos o proteínas)

Fototrofos: usan la luz como fuente de energía

El enriquecimiento de medios de cultivo para microorganisms heterótrofos suele hacerse añadiendo fuentes de nitrógeno (extracto de levadura, peptona …). Una alternativa fácil a los medios diseñados especificamente para microorganismos marinos (como el medio de Zobell o Agar 2216E), es utilizar los medios para heterótrofos terrestres pero preparándolos con agua de mar, un 33-35 % ¿?? de salinidad, o diluida 1/3 y ajustando el pH a 7.2 antes de esterilizar.

Para el aislamiento de bacterias lipolíticas puede añadirse Tween 80 al 1%. Esta característica se pone en evidencia con la adicción de Cl2Ca al 0.001%, lo que provoca la aparición de un halo blanco alrededor de las colonias lipolíticas por precipitación de las sales.Los microorganismos agarolíticos, abundantes en el medio marino, se diferencian sembrando la muestra de agua marina fresca en un medio sólido con agar al 1.5%.
Se mejora la diferenciación de las bacterias luminiscentes como Photobacterium inoculando las muestras en un medio con glicerol e incubanándolas a 10ºC durante 10 días.

Las bacterias psicrófilas (descritas por primera vez por Morita y Haight en 1964) tienen una temperatura óptima de crecimiento entre 5-10ºC y requieren tiempos de incubación de hasta tres semanas ya que su tase metabólica es muy baja.

Un medio de cultivo de enriquecimiento para bacterias con prosteca puede conseguirse, según Pérez Nieto, con la adicción al medio de compuestos orgánicos de un átomo de carbono como la metilamina. Se consigue un buen crecimiento con un cristal sumergido en dicho medio e incubando durante 10 días a 20ºC.

Las bacterias oligotróficas crecen bien en medios preparados con agua de mar suplementada con un 1.5% de agar-agar y una fuente orgánica de azúcar o aminoácidos (como el medio de Simidu). Este mismo medio, sin el aporte de fuentes de carbono, presenta un gran rendimiento para el aislamiento de microorganismos fotoautótrofos (incubándolo con luz), aunque este grupo a veces requiere un especial aporte de vitaminas y sales, especialmente sales de azufre. Es también muy útil, igualmente sin fuentes de carbono, para aislamiento de quimiolitótrofos (incubándolo sin luz).

Las bacterias quimiolitótrofas nitrificantes, abundantes en los sedimentos, crecen bien en un medio mineral con sulfato amónico o algún nitrito como fuente de energía (nitrógeno), en oscuridad y a 28ºC.

Los medios selectivos se enriquecen con la inclusión de algún componente específico para la población a seleccionar y añadiendo sustancias que inhiban el crecimiento de la flora no deseada. Un buen ejemplo sería el medio TCBS (tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa), especial para aislamiento de especies del género Vibrio, en el que la sustancia inhibitoria son las sales biliares.

Los hongos requieren para su cultivo medios con una fuente orgánica a la que se acompaña de antibióticoa para evitar la presencia de bacterias.
El cultivo de microalgas requiere medios con sales minerales suplementadas con vitaminas. También suelen añadirse antibióticos para evitar la contaminación bacteriana.

Para el cultivo de protozoos, que crecen difícilmente en medios sólidos, se requieren medios líquidos enriquecidos con otros microorganismos.